УДК [57.083+579.64]:632.35
https://doi.org/10.25230/2412-608X-2025-4-204-117-124

Ирина Михайловна Игнатьева*
Елена Петровна Кононова

Всероссийский центр карантина растений
Россия, 140150, Московская обл., м.о. Раменский, пгт. Быково, ул. Пограничная, 32
*babiraignirmi@yandex.ru

Аннотация. В статье описаны разработка и апробация нового молекулярно-генетического метода для усовершенствования схемы диагностики возбудителя угловатой пятнистости фасолиPseudomonas savastanoi pv. phaseolicola – фитопатогенной бактерии масличных и зернобобовых культур. Предпосылкой усовершенствования методов выявления и идентификации бактерии стали сокращение расходов и сроков проведения исследования в связи с увеличением экспорта зерна сои и гороха в страны-импортеры, выставляющих требования к семенной продукции, свободной от возбудителя болезни. В ходе разработки нового подтверждающего теста на основе метода ПЦР в режиме реального времени подобраны четыре варианта праймерных систем (PspF1/PspR1/PspP1; PspF2/PspR2/PspP2; PspF3/PspR3/PspP3 и PspF4/PspR4/PspP4) участков консенсусных последовательностей плазмид P. savastanoi pv. phaseolicola NZ_JAANPZ010000001, NC_007274. Апробация нового метода проведена в лаборатории бактериологии и анализа ГМО Испытательного лабораторного центра Всероссийского центра карантина растений. Показатели аналитической чувствительности определены при помощи растительных экстрактов сои с добавлением суспензии P. savastanoi pv. phaseolicola. Наличие ДНК исследуемого патогена подтверждено для экстрактов, содержащих фитопатогенную бактерию в концентрации не менее 2 × 102 КОЕ/мл. Определение показателя аналитической специфичности проведено путем тестирования 153 штаммов для рекомендуемого ПЦР в режиме реального времени с праймерами PspF3, PspR3 и зондом PspP3, показатель аналитической специфичности составил 99,4 %. В результате исследования данный ПЦР-тест рекомендуется к внедрению в диагностическую схему в качестве подтверждающего молекулярно-генетического метода.

Ключевые слова: зерно сои, экспорт, карантинные перечни, угловатая пятнистость фасоли, подтверждающий молекулярно-генетический метод, ПЦР в режиме реального времени, Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola

Для цитирования: Игнатьева И.М., Кононо-
ва Е.П. Разработка и апробация нового способа идентификации Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola // Масличные культуры. 2025. Вып. 4 (204). С. 117–124.

Читать статью

Список источников

1. EPPO Global Database. Inter-African Phytosanitary Council (IAPSC). Categorization: [Электронный ресурс] // EPPO. – Режим доступа: https://gd.eppo.int/rppo/IAPSC/categorization (дата обращения 2025-10-10).

2. Кононова Е.П., Игнатьева И.М. Новые ПЦР-РВ для идентификации Pseudomonas savastanoi pv.phaseolicola // Фитосанитария. Карантин растений. – 2024. – № S4-1 (20). – С. 39.

3. Noble T.J., Williams B., Douglas C.A. [et al.]. Evaluating molecular diagnostic techniques for seed detection of Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola, causal agent of halo blight disease in mungbean (Vigna radiata) // Australasian Plant Pathology. – 2022. – Vol. 51. – No. 4. – P. 453–459. https://doi.org/10.1007/s13313-022-00876-7.

4. Кучеров А.А., Качарава Н.И., Корнеев К.А. [и др.]. Мировая продовольственная безопасность и международная торговля продукцией АПК 2023/24; в 2 т. – М., 2024. – 442 с.: [Электронный ресурс]. – Режим доступа: https://agrimarkets.report/yearbook_20-23_2024 (дата обращения: 04.11.2024).

5. Seok Cho M., Jeon Y.H., Jung Kang M. [et al.]. Sensitive and specific detection of phaseolotoxigenic and nontoxigenic strains of Pseudomonas syringae pv. phaseolicola by TaqMan real-time PCR using site-specific recombinase gene sequences // Microbiological Research. – 2010. – Vol. 165. – No. 7. – Pp. 565–572. https://doi.org/
10.1016/j.micres.2009.11.001.

6. Kurowski C., Remeeus P.M. 7-023: Detection of Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola in Phaseolus vulgaris (bean) seed // International Rules for Seed Testing. Chapter 7: Validated Seed Health Testing Methods. – The Intern. Seed Testing Association, 2024: [Электронный ресурс]. – Режим доступа: https://www.seedtest.org/api/
rm/T36N8P34DCRA359/7-023-detection-of-pseudomonas-savasta-noi-pv-phase-6.pdf.

7. Cooper B. The detriment of salicylic acid to the Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola proteome // Molecular Plant-Microbe Interac-tions®. – 2022. – Vol. 35. – No. 9. – P. 814–824. https://doi.org/10.1094/MPMI-05-22-0104-R.

8. Arvizu‐Gómez J.L., Hernández‐Morales A., Llanos‐Vargas K.D. [et al.]. Influence of the low temperatures (18 °C) in the generation of intracellular oxidative stress in the phytopathogen bacterium Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola NPS3-121 // Journal of Phytopathology. – 2024. – Vol. 172. – No. 4. – Art. No. e13367. https://doi.org/
10.1111/jph.13367.10.1111/jph.13367.

9. Schaad N.W., Cheong S.S., Tamaki S. [et al.]. A combined biological and enzymatic amplification (BIO-PCR) technique to detect Pseudomonas syringae pv. phaseolicola in bean seed extracts // Phytopathology. – 1995. – Vol. 85. – No. 2. – Pp. 243–248. https://doi.org/10.1094/
Phyto-85-243.

10. Schaad N.W., Jones J.B., Chun W. Laboratory guide for identification of plant pathogenic bacteria. 3rd ed. / The American Phytopathological Society. – St. Paul, Minnesota, 2001. – Pp. 218–235.

11. Audy P. A rapid and sensitive PCR-based assay for concurrent detection of bacteria causing common and halo blight in bean seed // Phytopathology. – 1996. – Vol. 86 (4). – Pp. 361–366.

12. Игнатьева И.М., Каримова Е.В., Приходько С.И. Опыт внедрения методов ПЦР-диагностики при выявлении и идентификации возбудителя угловатой пятнистости фасоли Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola (Burcholder) Gardan et al. // Защита растений от вредных организмов: мат-лы X-й междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию Кубанского ГАУ, г. Краснодар, 21–25 июня 2021 г. – Краснодар: Кубанский ГАУ им. И.Т. Трубилина, 2021. – С. 159–161.

13. UniPro UGENE 50.0 [Электронный ресурс] // Компьютерная программа. – Режим доступа: https://www.top-4download.com/unipro-ugene-64bit/akwpdobd.html.

14. Basic Local Alignment Search Tool: [Электронный ресурс] // NCBI. – Компьютерная программа. – Режим доступа: https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi, свобод-ный (дата обращения 2025.10.10).

15. Доморацкая Д.А., Игнатьева И.М., Кононова Е.П. Разработка новых диагностических ПЦР-тестов для выявления возбудителя бактериального увядания Clavibacter insidiosus // Генетические и радиационные технологии в сельском хозяйстве: сб. докладов III-й междунар. молодеж. конф., г. Обнинск, 23–24 октября 2024 г. – Обнинск: НИЦ «Курчатовский институт» – ВНИИРАЭ, 2024. – С. 34–37.

16. ОФС.1.7.2.0008.15. Определение концентрации микробных клеток // Государственная фармакопея Российской Федерации: в 4 т. XIV изд-е. –М., 2018. – Т. 1.

17. Игнатьева И.М., Каримова Е.В. Определение унифицированного метода подготовки проб зерна гороха для идентификации комплекса бактериозов // Защита и карантин растений. – 2025. – № 1. – С. 26–32.

18. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Ч. 1. Основные положения и определения. – М.: Стандартинформ, 2009. – 24 с.

Сведения об авторах

И.М. Игнатьева, науч. сотр., зав. лаб.
Е.П. Кононова, агроном